类人胶原蛋白基因工程菌高密度发酵过程控制

目的优化基因工程菌Escherichia coli BL 21生产人源型胶原蛋白的高密度发酵工艺。方法建立一套以溶解氧浓度和比生长速率为中心的控制策略,采用溶氧反馈或pH反馈调节补料速度。结果 OD600可达150,胶原蛋白的表达量为9g／L。结论 20％-30％饱和度的溶解氧和0．1- 0．2 h-1的比生长速率有利于细胞生长和产物表达,其与降低乙酸等有害代谢副产物的积累密切相关。     

产菊粉酶丝状真菌菌株的筛选及产酶发酵条件的研究

经初筛和复筛,从菊芋周围土壤中筛选出酶活力较高的1株丝状真菌A24,经进行菌种鉴定,确定为黑曲霉.经单因子试验和多因子的正交试验分析,确定了产酶最高的最适条件为:3%菊芋汁、0.5%牛肉膏、2%(NH4)2HPO4、1?CO3、、初始pH 6.5,摇瓶转速160 r/min,28℃培养96 h,菊粉酶活力最高为30.2 U/ml.     

L-异亮氨酸产生菌TC-21的分阶段发酵控制研究

通过对L-异亮氨酸产生菌TC-21的5L发酵罐发酵研究，应用辅助软件对影响其发酵控制的各个因素进行分析，利用SAS软件对体积溶氧传递系数、菌体浓度和产酸进行回归拟合得到方程，提出了分阶段发酵控制模式，在该控制模式下，与实际恒定发酵过程比较，TC-21的产酸率提高了23．56％。     

透明质酸发酵条件的初步研究

采用兽瘟链球菌 (Streptococcuszooepidemicus)进行发酵生产透明质酸 (hyaluronicacid ,HA) .摇瓶研究表明 :葡萄糖的补加量和补加方式对HA发酵有着较大的影响 ,采用 4 0g·L- 1的初始葡萄糖浓度及维持培养过程 10g·L- 1的糖浓度 ,可使HA的产量达到 4 .0g·L- 1,分子量在 2 .0× 10 6 Da以上 .     

南极产低温蛋白酶菌株Marinobacter sp.R2的发酵条件及酶学性质研究

从南极海域沉积物中筛选到一产蛋白酶的菌株R2，经细菌学形态特征鉴定及16S rDNA序列分析鉴定，该菌株属于海杆菌属(Marinobacter)．生长特性研究表明该菌株属于兼性嗜冷菌，其最适生长温度为10～15℃．R2菌株能利用多种碳源产酶，最适产酶温度为20℃．粗酶液经硫酸铵盐析、DEAE cellulose-52柱层析进行初步分离纯化后进行酶学性质的研究．该菌株所分泌蛋白酶的最适作用温度为20℃，最适pH值为9～10，对热敏感．是典型的低温碱性蛋白酶．Ca^2 、Mn^2 、Cu^2 对该蛋白酶有较为明显的激活作用，而Cd^2 、Co^2 则能抑制酶活．高浓度的变性剂、PMSF、AEBSF和EDTA都能抑制该蛋白酶，表明该酶属于丝氨酸蛋白酶，且金属离子对酶活性中心构象有关键性的影响．     

灵芝酱油的生产工艺研究

筛选出高生物量、多糖灵芝菌株和富锗培养基,采用固体同步发酵(SSF)工艺,成功生产出富含有机锗和灵 芝多糖的灵芝酱油,并取得了良好经济和社会效益.     

固定化Streptomyces sp.108转化美伐他汀为普伐他汀的研究

报道了链霉菌(Streptomyces sp．108)固定化细胞制备的最适条件。初始底物(美伐他汀)浓度300mg/L，间接补加底物总浓度达到800mg/L时，普伐他汀产量为495mg/L，转化率为60％。在底物浓度为300mg/L时重复发酵3次，500mg/L时重复发酵2次，转化率分别达50．5％和53％。     

树干毕赤酵母连续发酵戊糖己糖生成酒精

以30g/L葡萄糖和15g/L木糖混合物为发酵底物,在工作体积约为1.5L的全混釜生物反应器中,对一株树干毕赤酵母驯化菌株P2进行了一级和二级连续发酵研究。结果表明,在一级连续发酵木糖、葡萄糖混合物中,当稀释率为0.06h-1时,酒精产率达到最大0.790g/(L·h),发酵溢出液中酒精浓度为13.16g/L,还原糖利用率仅为77.51%。在二级连续发酵木糖、葡萄糖混合物时,当底物流加速度约为60mL/h时,发酵液酒精浓度为13.23～14.85g/L,还原糖利用为83.23%～84.37%。     

中药红花与产纤溶酶菌株相互影响的研究

作者采用生长曲线法衡量不同浓度红花对产纤溶酶菌株C2-13的生长影响；纤维蛋白平板法测量纤溶酶活性；邻二氮菲-Fe^2 氧化法测量羟自由基清除率；乙酸酐直接测定法测量总胆固醇；HPLC法分析发酵产物．结果表明：产纤溶酶菌株C2-13能显著提高红花降血清总胆固醇的功效以及抗羟自由基氧化的能力；一定浓度红花的加入对C2-13的生长和纤溶酶活性有明显促进作用．HPLC分析还观察到红花经发酵炮制后，其成分发生了改变．说明中药红花与产纤溶酶菌株C2-13可相辅相成，互相促进．     

分泌性表达人rPA毕赤酵母工程菌株的构建及发酵条件的初步优化

通过PCR扩增得到组织型纤溶酶原激活剂突变体Reteplase(rPA)基因片断，将该基因片断插入到含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列载体pPIC9K中，构建了重组表达质粒pPICgK／rPA，转化Pichia pastoris GS115宿主菌．通过比较转化子在MM和MD平板上的生长状况，筛选His^ Mut^s表型转化子．并在2．0mg/mL G418平板筛选得到多拷贝转化子GR10，GR11．摇瓶培养，甲醇诱导外源基因表达，表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析，结果表明重组蛋白分子量约39ku，能与特异性单克隆抗体发生免疫反应；体外气泡法测定rPA活性，结果显示重组蛋白具有较好的纤溶活性．通过正交试验，优化发酵条件，表达活性最高为1050IU／mL．